一文与您分享肝细胞培养试剂盒的操作步骤

　　肝细胞培养试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色，根据颜色的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。

 

　　今天小编要与大家分享的是肝细胞培养试剂盒的操作步骤：

 

　　1、标本的采集及保存：

 

　　（1）血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃经过一夜夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

 

　　（2）血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

 

　　（3）细胞培养物上清或其它生物标本：请1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

 

　　（4）样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10，000倍。

 

　　2、试剂的准备：

 

　　按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂，胰岛素elisa试剂盒中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的，自配的缓冲液应用pH计测量较正，从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

 

　　3、加样：

 

　　分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

 

　　4、温育：

 

　　用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 

　　5、洗涤：

 

　　小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

 

　　6、显色：

 

　　每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

 

　　7、测定：

 

　　以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。